RNAscope®探针设计

​  一个标准探针是由 20 对双Z 探针组成，靶向长度为

1000 个碱基的区域。每个Z 靶向探针由三部分组成：底端区域与靶 RNA 互补，是与靶标特异性杂交的区域，杂交性能统一；间隔序列连接底端与顶端区域；来自同一对双Z靶探针的两个相邻的顶端区域形成长为 28 个碱基的结合位点，可与信号预放大分子结合。两个独立的 Z 探针构成探针对，要能与靶标序列串联杂交，从而保证可以与信号预放大分子结合。杂交过程中可能会发生单个 Z 探针的非特异性杂交,但单个Z探针与信号预放大分子的杂交很不稳定，因而可以在清洗步骤中除去，这一设计可以极大地降低背景噪音。

RNAscope®探针杂交和扩增

步骤 1：平均 20 个 Z 探针对与靶 RNA结合

步骤 2：信号预放大分子与 乙探针对顶端区域结合

步骤 3：多个信号放大分子与每个信号预放大分子的杂交

步骤 4：多个标记探针与每个信号放大分子的杂交20个Z探针对，多重信号放大分子，多个标记探针——这一级联杂交使一个靶 RNA 可以与上千个标记探针

杂交

RNAscope®信号检测

  标记探针含有发色酶或荧光基团，每个靶RNA 形成一个点状信号。点的大小与杂交到靶 RNA 上的 Z 探针对数目成正比。

  三个 Z探针对杂交产生的信号即可被明场显微镜或荧光显微镜检测到。

RNAscope技术优势

1. 灵敏度高：级联信号放大设计提升了检测灵敏度，从而可以检测到单拷贝 RNA 分子。
   
2. 特异性强：专利探针设计确保了靶向特异性结合，而双 Z 探针设计可以抑制非特异性杂交信号扩增。
   
3. 保留形态学特征：可以在复杂的组织环境中进行基因表达的空间解析。
   
4. 单细胞水平定量：高灵敏度和形态学特征的结合实现了单细胞分辨率上的单分子检测。
   
5. 通用性：几乎适用于所有组织类型中的所有基因。

RNAscope®检测试剂盒选择指南

满足您的任何需求的RNA ISH方案

RNAscope®配件

温度和湿度优化以实现最佳检测性能

HybEZ™ II 杂交系统

    RNAscope ®检测的成功实施与杂交环境直接相关。ACD HybEZ™ II 杂交系统及其准确保持温度稳定的能力对于 RNAscope ®和 BaseScope™ 工作流程的成功至关重要。

    HybEZ™ II 烤箱是一种简单、易于使用、低调的台式杂交烤箱，可为 RNA-ISH 提供卓越的条件，并且是 ACD 可以为我们的客户提供我们的 RNAscope ®和 BaseScope™的唯一杂交烤箱履约担保。HybEZ™ II 烤箱提供了一个密封垫圈、温控加湿室，是优化 RNAscope ®分析性能所必需的。

    该系统包括：HybEZ 烤箱（PN 321710/321720）、湿度控制托盘（PN 310012）和 HybEZ 加湿纸（2 张 PN 310025）、EZ-Batch 洗涤托盘（PN 321717）、EZ-Batch 载玻片架（PN） 321716)

RNAscope®EZ-Batch™切片处理系统

 RNAscope®EZ-Batch™切片处理系统是为了提高手动检测操作效率而设计的，包括RNAscope®EZ-Batch™载物片夹和 EZ-Batch”清洗槽两部分。RNAscope®EZ-Batch™载玻片夹与 HybEZ湿盒完全兼容，有一个很简单的锁定机制，避免在清洗过程中切片移动。该装置节省了清洗步骤中在载玻片架和 Tissue-Tek 清洗皿之间转移切片消耗的时间。每个RNAscope®EZ-Batch™切片处理系统可以同时容纳 20 张切片。